Способ лимфоцитотоксического теста

Способ лимфоцитотоксического теста

Наиболее распространенным рутинным способом лимфоцитотоксического теста является так называемая NIH-лимфоцитотоксическая реакция Brand et al. , 1970 Для ее проведения к 1 мкл суспензии лимфоцитов в забуферен. ном растворе Хенкса, содержащем приблизительно 2000—3000 лимфоцитов, добавляют такое же количество тест-сыворотки. После инкубации в течение 30 мин при комнатной температуре в эту смесь добавляют комплемент, представляющий собой 5 мкл сыворотки кролика. После дальнейшей инкубации при комнатной температуре в течение 60 мин в пробирку добавляют 3 мкл 5% водного раствора эозина, который может проникать внутрь только мертвых лимфоцитов, окрашивая их. После дальнейшей инкубации при комнатной температуре в течение 60 мин в пробирку добавляют 3 мкл 5% водного раствора эозина, который может проникать внутрь только мертвых лимфоцитов, окрашивая их. Реакцию фиксируют добавлением в пробирку 10 мкл безкислотного 37% раствора формалина. Учет результатов реакции проводят при фазово-контрастном микроскопировании препаратов при 150-кратном увеличении.

При этом живые лимфоциты представляются небольшими, сильно преломляющими свет неокрашенными образованиями, в то время как погибшие лимфоциты — крупными и темноокрашенными. Для определения антигенов, содержащихся в В-клеточных лимфоцитах, но не в Т-клетках (аллоаитигеиы HLA генного локуса D), последние необходимо удалить из лимфоцитарной суспензии. Это обычно достигается либо путем умерщвления («розеткообразования») Т-лимфоцитов эритроцитами крови барана, либо накоплением В-лимфоцитов на определенных поверхностях (например, на нейлоновой вате) с последующим их вымыванием. Другим методом выявления аллоантигенов в В-лимфоцитах является использование так называемой двухцветной флюоресцентной техники Rood et al.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Loading...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Можно использовать следующие HTML-теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите человечка с поднятой рукой: